Différences entre versions de « Biologie cellulaire »

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* 8 astuces pour augmenter vos chances de succès.
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Il existe malgré tout des prérequis pour améliorer l’efficacité de vos transfections, voici quelques astuces :
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Optimiser la quantité d’ADN
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La quantité dépend du type cellulaire et de l’ADN à transfecter et requiert une optimisation
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Une gamme comprise entre 1 et 10 µg pour une Boîte de Pétri traitée culture cellulaire (Ø 60 mm) convient généralement (à adapter suivant la surface utilisée)
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Optimiser le ratio ADN/agent de Transfection
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Un ratio compris entre 1.5 :1 à 4 : 1 (Agent de transfection/ADN) fonctionne bien pour la plupart des lignées cellulaires.
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Vérifier la qualité de votre ADN >  Certains contaminants (endotoxines, sels, éthanol) peuvent impacter négativement l’efficacité de transfection ou avoir des conséquences sur la viabilité cellulaire
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Optimiser la durée de transfection
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Les temps de contacts peuvent varier entre 30 min et 4 heures voir sur la nuit pour certaines lignées.
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Vérifier l’état des cellules (morphologie, viabilité, état prolifératif …). Les cellules en phase de division son généralement plus réceptives à l’introduction d’acide nucléique extérieur que des cellules quiescentes.
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Une réduction de la durée de transfection peut permettre de réduire l’impact sur la viabilité du procédé de transfection et de réduire la cytotoxicité
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Choisir un agent de transfection tolérant au sérum lorsque cela est nécessaire
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Certaines lignées cellulaires exigent la présence de sérum, il est donc nécessaire de vérifier la compatibilité de votre agent de transfection !.................                                                 
 
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Version du 3 mai 2018 à 20:57


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  • .Les techniques de biologie cellulaire et moléculaire ont connu un formidable essor dans les sciences de la vie et leurs applications sont de plus en plus présentes en R & D pharmaceutique dans les domaines de la pharmacologie et de la toxicologie.

Les technologies d’analyse cellulaire et moléculaire sont utilisées à différents stades des processus de R & D notamment comme outil d’aide à la décision au développement de médicaments, dans des modèles de screening ou au cours du développement lui-même. Elles rendent possibles l’élucidation des mécanismes d’action des substances endogènes ou des candidats-médicaments sur l’organisme, mais aussi l’identification des déterminants moléculaires thérapeutiques (biomarqueurs)............................................................................... ................................................................................ ................................................................................ ................................................................................

  • On retrouve la PCR, en association avec d'autres techniques, dans la compréhension de la manière dont une cellule répond aux conditions extérieures – une problématique clé dans les études sur le contrôle de l'expression des gènes. Dans une cellule donnée, on estime que de 10 000 à 15 000 gènes sont susceptibles d'être exprimés chez l'homme et la plupart des mammifères (« expression » veut dire que ces gènes sont copiés – on dit sont transcrits – en ARN messagers).Le « paysage » constitué par ces ARN messagers est représentatif de l'état de différenciation de cette cellule (ce n'est pas le même pour une cellule musculaire ou pour un neurone), mais également de son état fonctionnel (par exemple soumis à un stress ou à une stimulation hormonale). Les profils d'expression des transcrits connaissent des variations qualitatives ou quantitatives qui reflètent la dynamique biologique de la cellule. ...............................................................................

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